CNTF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402471-ACT

O CNTF humano (fator neurotrófico ciliar) é uma citocina secretada da família da IL-6 que sustenta a sobrevivência neuronal, a diferenciação e as respostas ao estresse nos sistemas nervoso central e periférico. O CNTF sinaliza principalmente por meio do complexo de receptores CNTFRα/LIFR/gp130 para ativar as vias JAK/STAT, com participação adicional das vias MAPK/ERK e PI3K/AKT, que influenciam o crescimento de neuritos, a biologia da glia e a comunicação cruzada com processos inflamatórios. Alterações na expressão de CNTF e na atividade de suas vias têm sido estudadas em neurodegeneração, lesão retiniana e em contextos desmielinizantes ou neuropáticos, nos quais o suporte trófico e a gliose reativa moldam fenótipos associados à doença. Modelos in vitro e in vivo utilizam a modulação de CNTF para investigar programas de neuroproteção, interações neurônio–glia e redes transcricionais ligadas à regeneração e ao estresse metabólico.

CNTF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CNTF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CNTF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CNTF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CNTF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CNTF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CNTF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CNTF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CNTF em células tumorais com expressão de CNTF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.