CNPase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402463

Descripción general

CNP codifica la 2’,3’-nucleótido cíclico 3’-fosfodiesterasa (CNPasa), una enzima asociada a la mielina, enriquecida en oligodendrocitos, que hidroliza nucleótidos cíclicos 2’,3’ y contribuye a la formación y el mantenimiento de la vaina de mielina. La CNPasa se localiza en la mielina no compacta y en microdominios citoesqueléticos/de membrana, donde se la vincula con el metabolismo del ARN, el crecimiento de prolongaciones y la regulación de la morfología oligodendroglial. A través de estas funciones, la CNPasa favorece las interacciones axón–glía y la estabilidad de la mielina, y converge con vías que gobiernan la diferenciación glial y las respuestas neuroinflamatorias. La alteración de la expresión de CNP o de la actividad de la CNPasa se ha asociado con contextos desmielinizantes y neurodegenerativos, lo que la convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la biología de la sustancia blanca.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CNPase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CNP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CNP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CNP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CNPase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CNP para la investigación de la señalización de CNPase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CNP críticos para la función de CNPase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CNP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CNPase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CNPase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CNP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CNPase (h) y el plásmido HDR CNPase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CNP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CNP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.