CNG-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419713

Descripción general

Cnga1 codifica la subunidad alfa del canal activado por nucleótidos cíclicos CNG-1, un componente clave de la maquinaria de fototransducción en los fotorreceptores de bastones del ratón. Al formar canales catiónicos regulados por cGMP en la membrana plasmática del segmento externo, CNG-1 vincula los cambios de cGMP inducidos por la luz con la entrada de Na⁺/Ca²⁺, modulando el potencial de membrana y la señalización sináptica posterior. La función de este canal se integra con el metabolismo del cGMP, la homeostasis del Ca²⁺ y los mecanismos de adaptación que regulan la sensibilidad visual. La alteración de la señalización dependiente de CNGA1 se asocia con disfunción de los bastones y fenotipos degenerativos de la retina, por lo que es relevante para estudios de los mecanismos de las enfermedades hereditarias de la retina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CNG-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cnga1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cnga1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cnga1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CNG-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cnga1 para la investigación de la señalización de CNG-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cnga1 críticos para la función de CNG-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cnga1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CNG-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CNG-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cnga1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CNG-1 (m) y el plásmido HDR CNG-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cnga1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cnga1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.