Clusterin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417830-ACT

O CLU humano codifica a clusterina, uma glicoproteína secretada e intracelular que atua como chaperona extracelular, regulando a proteostase, o transporte de lipídios e a inibição do complemento. A clusterina influencia programas de sobrevivência celular ao modular respostas ao estresse oxidativo, a apoptose e a depuração de proteínas mal dobradas ou agregadas, interagindo com a sinalização inflamatória e a remodelação da matriz extracelular. Ela está implicada na neurodegeneração e na biologia cardiovascular por efeitos no processamento de amiloide, na integridade sináptica e na inflamação vascular, e é frequentemente estudada em biologia tumoral por seu papel na adaptação ao estresse e em mecanismos de resistência a terapias. Essas funções tornam o CLU um ponto útil para dissecar vias que conectam estresse proteotóxico, regulação imune e respostas a lesão tecidual.

Clusterin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLU sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Clusterin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLU em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLU, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Clusterin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLU nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Clusterin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Clusterin em células tumorais com expressão de CLU silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.