CLK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419688

Descripción general

Clk1 codifica la quinasa 1 tipo CDC (CLK1), una proteína quinasa de doble especificidad que fosforila factores de empalme ricos en serina/arginina (SR) y ayuda a controlar la dinámica del espliceosoma. Mediante la modulación del empalme alternativo y el procesamiento del pre-ARNm, CLK1 contribuye a programas transcripcionales que regulan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la expresión génica adaptativa al estrés. La actividad de CLK1 se interseca con redes de señalización que ajustan el procesamiento del ARN, incluidas vías sensibles al estrés celular y a señales de crecimiento, influyendo así en la diversidad del proteoma. La desregulación de la actividad de las quinasas de la familia CLK y los patrones de empalme aberrantes se han implicado en múltiples fenotipos relevantes para enfermedades, lo que convierte a Clk1 de ratón en un nodo útil para estudios mecanísticos del procesamiento de ARN en el desarrollo y la patología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CLK1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Clk1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Clk1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Clk1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CLK1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Clk1 para la investigación de la señalización de CLK1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Clk1 críticos para la función de CLK1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Clk1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CLK1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CLK1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Clk1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CLK1 (m) y el plásmido HDR CLK1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Clk1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Clk1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.