CLK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419688

Übersicht

Clk1 kodiert die CDC-like Kinase 1 (CLK1), eine dualspezifische Proteinkinase, die serin/argininreiche (SR-)Spleißfaktoren phosphoryliert und zur Kontrolle der Dynamik des Spleißosoms beiträgt. Durch die Modulation des alternativen Spleißens und der prä-mRNA-Prozessierung trägt CLK1 zu Transkriptionsprogrammen bei, die den Zellzyklus, die Differenzierung und die stressadaptive Genexpression steuern. Die Aktivität von CLK1 ist mit Signalnetzwerken verknüpft, die die RNA-Prozessierung regulieren, darunter Signalwege, die auf zellulären Stress und Wachstumsreize reagieren, und beeinflusst dadurch die Vielfalt des Proteoms. Eine dysregulierte Aktivität von CLK-Familienkinasen und abweichende Spleißmuster wurden mit mehreren krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch das Mausgen Clk1 einen geeigneten Ansatzpunkt für mechanistische Studien der RNA-Prozessierung in Entwicklung und Pathologie darstellt.

Das CLK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Clk1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Clk1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Clk1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CLK1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Clk1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CLK1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Clk1-Exone abzielen, die für die CLK1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Clk1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CLK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CLK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Clk1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CLK1 HDR-Plasmid (m) und CLK1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Clk1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Clk1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.