CLCA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402998-ACT

ヒトCLCA1（chloride channel accessory 1）は分泌型でムチン関連の糖タンパク質であり、主に気道および腸管の上皮で発現して、上皮のイオン輸送、粘液の水和、バリア機能を調節します。CLCA1はカルシウム活性化クロライド伝導に間接的に影響し、粘膜組織における杯細胞分化や炎症性シグナル伝達プログラムとも関連しています。その発現は上皮リモデリング過程と連動しており、気道での粘液過分泌やアレルギー性炎症に加えて、消化管疾患の文脈における上皮状態の破綻とも関連づけられています。CLCA1はムチン生物学および上皮分化と密接に結び付いているため、分泌系譜への移行や粘膜免疫相互作用を研究するうえで有用なマーカーであり、機序解明上の重要な結節点にもなります。

CLCA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CLCA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CLCA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CLCA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCLCA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CLCA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCLCA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCLCA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCLCA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCLCA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。