claudin-18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404431

Übersicht

CLDN18 kodiert Claudin-18, ein tetraspanes Tight-Junction-Protein, das in gewebespezifischen Kontexten – darunter Magen- und Lungenepithel – zur parazellulären Barrierefunktion und zur epithelialen Polarität beiträgt. Durch die Organisation von Tight-Junction-Strängen zusammen mit anderen Claudinen und Gerüstproteinen wie Mitgliedern der ZO-Familie hilft Claudin-18, die Integrität der Zellkontakte, die Ionenselektivität sowie Signalwege zu regulieren, die mit der Zytoskelettdynamik verknüpft sind. Eine veränderte CLDN18-Expression oder eine abweichende Lokalisation an den Zellkontakten ist mit epithelialem Remodeling und einer gestörten Barrierehomöostase assoziiert – Prozesse, die häufig mit Entzündung und Tumorbiologie in Verbindung stehen. CLDN18 wurde außerdem im Zusammenhang mit Fusionsereignissen und Linien-/Zellschicksalsprogrammen untersucht, die Zelladhäsion und Differenzierungszustände beeinflussen.

Das claudin-18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CLDN18-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CLDN18-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CLDN18 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die claudin-18-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CLDN18-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der claudin-18-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CLDN18-Exone abzielen, die für die claudin-18-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CLDN18-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom claudin-18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom claudin-18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CLDN18-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das claudin-18 HDR-Plasmid (h) und claudin-18 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CLDN18-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CLDN18-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.