Clathrin Light Chain B/CLTBCRISPR激活质粒(h): sc-404228-ACT

CLTB 编码网格蛋白轻链 B，是网格蛋白包被囊泡的核心组成部分，调控受体介导的内吞作用以及细胞内在质膜、内体与反式高尔基网络之间的转运。CLTB 通过与网格蛋白重链及 AP2 等适配蛋白复合体共同调节网格蛋白晶格的动态变化，参与货物选择、囊泡出芽以及特定细胞类型中的突触囊泡再循环。这一转运轴影响信号持续时间与受体周转，从而将 CLTB 相关过程与细胞稳态、增殖和应激反应联系起来。内吞转运失衡及网格蛋白依赖性运输常在神经生物学、病毒入侵途径以及癌症相关受体信号改变等研究背景中被重点关注。

Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CLTB的表达。

Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CLTB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CLTB转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Clathrin Light Chain B/CLTB表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CLTB位点，并能够研究内源性位点上依赖于Clathrin Light Chain B/CLTB的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CLTB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Clathrin Light Chain B/CLTB通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。