CLASP2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403609-NIC

CLASP2 (cytoplasmic linker–associated protein 2) è una proteina che si localizza all’estremità “plus” dei microtubuli e ne traccia la crescita, contribuendo a stabilizzarli e organizzarli a livello della corteccia cellulare e dei cinetocori, a supporto dell’assemblaggio del fuso mitotico, della segregazione dei cromosomi e della migrazione cellulare direzionale. Accoppiando i microtubuli a complessi corticali e associati alle adesioni, CLASP2 contribuisce al dialogo tra componenti del citoscheletro che influenza la polarità cellulare e la fedeltà della mitosi. La sua regolazione interseca reti di segnalazione che controllano la dinamica dei microtubuli e la geometria degli attacchi, inclusi i pathway che governano il posizionamento del fuso e la funzione del centrosoma. Un’attività o un’espressione deregolata di CLASP2 è stata collegata a mitosi aberranti e a comportamenti migratori alterati, rendendola rilevante per studi sull’instabilità genomica e su fenotipi proliferativi in modelli cellulari pertinenti per la malattia.

CLASP2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLASP2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLASP2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLASP2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLASP2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.