Plasmide Double Nickase (h) CLASP2: sc-403609-NIC

CLASP2 (cytoplasmic linker–associated protein 2) est une protéine de suivi de l’extrémité plus des microtubules qui stabilise et organise les microtubules au niveau du cortex cellulaire et des kinétochores, soutenant l’assemblage du fuseau, la ségrégation des chromosomes et la migration cellulaire directionnelle. En couplant les microtubules à des complexes corticaux et associés aux adhérences, CLASP2 contribue au dialogue entre réseaux cytosquelettiques, ce qui influence la polarité cellulaire et la fidélité de la mitose. Sa régulation s’inscrit à l’interface de réseaux de signalisation qui contrôlent la dynamique des microtubules et la géométrie de leurs attachements, notamment des voies régissant le positionnement du fuseau et la fonction du centrosome. Une activité ou une expression dérégulée de CLASP2 a été associée à des mitoses aberrantes et à des comportements migratoires modifiés, ce qui la rend pertinente pour l’étude de l’instabilité génomique et de phénotypes prolifératifs dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

CLASP2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CLASP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CLASP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CLASP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CLASP2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.