Plásmido CRISPR de Activación (h) CLASP1: sc-404219-ACT

CLASP1 (proteína 1 asociada al enlazador citoplasmático) es una proteína que se une al extremo plus de los microtúbulos y los sigue, estabilizando y organizando las redes de microtúbulos en la corteza celular y en los cinetocoros, y coordinando el ensamblaje del huso, la alineación cromosómica y la segregación fiel durante la mitosis. Mediante interacciones con proteínas EB, proteínas CLIP y factores asociados al cinetocoro, CLASP1 favorece el “rescate” de los microtúbulos y la inestabilidad dinámica, esenciales para la polaridad celular, el tráfico intracelular y la migración dirigida. La alteración de la dinámica de microtúbulos regulada por CLASP1 puede promover errores mitóticos y aneuploidía, vinculando su función con vías ampliamente relevantes para el control de la proliferación y la estabilidad del genoma. En consecuencia, CLASP1 se investiga con frecuencia en estudios sobre regulación del citoesqueleto, progresión del ciclo celular y mecanismos que conectan el comportamiento de los microtúbulos con la transformación celular y las respuestas al estrés.

CLASP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLASP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CLASP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLASP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLASP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CLASP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLASP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CLASP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CLASP1 en células tumorales con expresión de CLASP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.