CKR-7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402150-ACT

Il gene umano **CCR7** codifica per il recettore chemiotattico **CKR-7**, un recettore accoppiato a proteine G che lega **CCL19** e **CCL21** per regolare la migrazione direzionata di linfociti T, cellule dendritiche e altre sottopopolazioni di leucociti. La segnalazione mediata da CCR7 coordina chemotassi, adesione e rimodellamento del citoscheletro attraverso vie che includono **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT** e le **GTPasi della famiglia Rho**, sostenendo l’organizzazione dei tessuti linfoidi e la sorveglianza immunitaria. Un’espressione deregolata di CCR7 è stata associata ad alterazioni del traffico infiammatorio e a pattern di disseminazione metastatica in diverse neoplasie, nelle quali i gradienti di chemochine influenzano l’homing delle cellule tumorali. Di conseguenza, CCR7 è ampiamente studiato in modelli di posizionamento delle cellule immunitarie, dinamiche di presentazione dell’antigene e programmi di migrazione guidati dal microambiente.

CKR-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CCR7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CKR-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CCR7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CCR7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CKR-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CCR7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CKR-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CKR-7 nelle cellule tumorali con espressione di CCR7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.