Plasmide CRISPR/Cas9 KO Chx10 (h): sc-401103

Présentation

VSX2 (Chx10) est un facteur de transcription à homéoboîte qui joue un rôle central dans la spécification du champ oculaire et la prolifération des cellules progénitrices rétiniennes, en contribuant à coordonner la neurogenèse et les décisions de destinée cellulaire au cours de la rétinogenèse chez les vertébrés. Il régule des programmes transcriptionnels qui contrôlent le développement des neurones bipolaires rétiniens et le maintien de l’identité de la rétine neurale, en s’intégrant à des réseaux de signalisation du développement tels que WNT/β-caténine, SHH et la régulation génique associée à Notch. Des altérations de la fonction de VSX2 ont été associées à des malformations oculaires congénitales, notamment la microphtalmie et l’anophtalmie, et une expression dérégulée est pertinente pour l’étude des mécanismes des dystrophies rétiniennes ainsi que pour le développement d’organoïdes rétiniens dérivés de cellules souches. En tant que régulateur se liant à l’ADN, Chx10 est couramment étudié pour ses effets sur les trajectoires de différenciation, l’engagement de lignée et les réseaux de régulation génique dans des modèles oculaires et neuraux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Chx10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VSX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VSX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VSX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Chx10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VSX2 pour l'étude de la signalisation de Chx10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VSX2 essentiels à la fonction de Chx10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VSX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Chx10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Chx10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VSX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Chx10 plasmide HDR (h) et le Chx10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VSX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VSX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.