CHSY3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429749

Panoramica

Chsy3 codifica la condroitin solfato sintasi 3 (CHSY3), una glicosiltransferasi residente nel Golgi che partecipa all’allungamento delle catene di glicosaminoglicani di condroitin solfato sui proteoglicani. Coordinandosi con altre polimerasi del condroitin e con le solfotransferasi, CHSY3 influenza l’organizzazione della matrice extracellulare, il sequestro dei fattori di crescita e la segnalazione cellula–matrice che modellano la morfogenesi e l’omeostasi dei tessuti. Nei sistemi murini, alterazioni della composizione del condroitin solfato possono influenzare lo sviluppo della cartilagine e dello scheletro, la plasticità neurale e i microambienti infiammatori modulando vie dipendenti dai proteoglicani. Di conseguenza, Chsy3 è rilevante per studi meccanicistici sul rimodellamento della matrice extracellulare e sulla biologia dei proteoglicani in modelli con fenotipi muscoloscheletrici e neurobiologici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHSY3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Chsy3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Chsy3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Chsy3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHSY3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Chsy3 per lo studio della segnalazione di CHSY3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Chsy3 critici per la funzione di CHSY3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Chsy3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CHSY3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CHSY3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Chsy3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CHSY3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CHSY3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Chsy3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Chsy3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.