Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) CHIP/STUB1: sc-400815-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CHIP/STUB1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CHIP/STUB1 (h) y el plásmido de doble nickasa CHIP/STUB1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a STUB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CHIP/STUB1 Anticuerpo (G-2): sc-133066
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CHIP/STUB1 | sc-400815-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CHIP/STUB1 | sc-400815-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STUB1 codifica CHIP, una ligasa E3 de ubiquitina tipo U-box y co-chaperona que acopla el reconocimiento de clientes por HSP70/HSP90 con su ubiquitinación y degradación por el proteasoma, regulando así el control de calidad proteico. CHIP/STUB1 también se conecta con las vías de autofagia y la señalización de respuesta al estrés para mantener la proteostasis en condiciones como el choque térmico y el estrés oxidativo. Al controlar la estabilidad de proteínas mal plegadas o dañadas, influye en la homeostasis celular, la función mitocondrial y procesos relacionados con la apoptosis. La desregulación o las variantes patogénicas en STUB1 se asocian con neurodegeneración y fenotipos de ataxia, lo que lo convierte en un nodo ampliamente estudiado en vías relevantes para las proteinopatías.
CHIP/STUB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus STUB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de STUB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de STUB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con STUB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.