CHD5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402429-ACT

CHD5 (proteína 5 de ligação ao DNA por helicase com cromodomínio) é um remodelador de cromatina dependente de ATP, enriquecido em neurónios, da família SNF2, que coordena o posicionamento de nucleossomas e os programas transcricionais necessários para a diferenciação e a estabilidade do genoma. Por meio dos seus cromodomínios e da atividade helicase/ATPase, a CHD5 modula a acessibilidade da cromatina em elementos regulatórios e interage com vias epigenéticas que controlam a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a expressão génica específica de linhagem. A redução da atividade de CHD5 tem sido associada a perturbações no controlo transcricional e à instabilidade cromossómica, e a alteração da expressão de CHD5 é frequentemente ligada a redes supressoras de tumores no neuroblastoma e noutros tipos de cancro. Na investigação biomédica, a CHD5 é amplamente estudada pelos seus papéis na dinâmica da cromatina, no desenvolvimento neuronal e nos mecanismos pelos quais a desregulação epigenética contribui para fenótipos relevantes para a doença.

CHD5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHD5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CHD5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHD5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHD5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CHD5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHD5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CHD5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CHD5 em células tumorais com expressão de CHD5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.