CHD1L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404840

Panoramica

CHD1L (chromodomain helicase DNA binding protein 1-like) è un rimodellatore della cromatina ATP-dipendente implicato nella regolazione dell’accessibilità del DNA durante la trascrizione, nelle risposte allo stress replicativo e nella riparazione del danno al DNA. Attraverso la sua attività elicasi/ATPasi e le interazioni mediate dal cromodominio, CHD1L contribuisce a coordinare le dinamiche della cromatina che influenzano la stabilità del genoma e la progressione del ciclo cellulare. Un’alterazione dell’espressione di CHD1L o un aumento del numero di copie è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è frequentemente studiata per i suoi collegamenti con programmi trascrizionali oncogenici, la tolleranza allo stress replicativo e fenotipi invasivi. Queste caratteristiche rendono CHD1L un bersaglio rilevante per analizzare il controllo, dipendente dalla cromatina, dell’espressione genica e la scelta dei pathway di riparazione del DNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHD1L (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHD1L in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHD1L insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHD1L a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHD1L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHD1L per lo studio della segnalazione di CHD1L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHD1L critici per la funzione di CHD1L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHD1L per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CHD1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CHD1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHD1L. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CHD1L Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CHD1L (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHD1L per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHD1L definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.