CDK5RAP3 Lentiviral Activation Particles (h): sc-408965-LAC

CDK5RAP3 (auch als C53 bekannt) ist ein multifunktionelles zytoplasmatisches und perinukleäres Protein, das an der Regulation des Zellzyklusfortschritts, stressadaptiver Signalwege und der Protein-Homöostase beteiligt ist. Es wird mit der Modulation kinasegesteuerter Signalwege, ubiquitinabhängiger Prozesse und der qualitätssichernden Kontrolle im Zusammenhang mit dem endoplasmatischen Retikulum in Verbindung gebracht und steht damit im Kontext zellulärer Antworten auf proteotoxischen und metabolischen Stress. Aufgrund dieser Funktionen wird CDK5RAP3 in Situationen untersucht, in denen Proliferation, Apoptose und adaptive Stressprogramme umgestaltet werden, darunter onkogene Signalgebung und entzündungsassoziierte Phänotypen. Veränderte CDK5RAP3-Expression wurde in mehreren Tumortypen beschrieben, was mechanistische Forschung dazu motiviert, wie es Wachstumskontrolle und Signalweg-Crosstalk in menschlichen Zellen beeinflusst.

CDK5RAP3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CDK5RAP3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CDK5RAP3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CDK5RAP3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CDK5RAP3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CDK5RAP3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.