Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc25A (h): sc-400345

Présentation

CDC25A code la phosphatase humaine à double spécificité Cdc25A, un activateur clé des kinases dépendantes des cyclines (CDK) qui favorise la progression du cycle cellulaire en déphosphorylant des résidus inhibiteurs des CDK lors de la transition G1/S et au moment de l’entrée en phase S. Son activité est étroitement contrôlée par la signalisation des points de contrôle, notamment les voies ATR/ATM–CHK1/CHK2, qui régulent la stabilité de CDC25A en réponse au stress de réplication et aux dommages de l’ADN. En couplant les signaux prolifératifs à la surveillance de l’intégrité du génome, Cdc25A influence le calendrier de la réplication de l’ADN, la reprise après activation des checkpoints et la capacité à entrer en mitose. Une expression dérégulée de CDC25A ou une altération de son turnover a été associée à une prolifération aberrante et à une instabilité génomique, ce qui en fait une cible fréquente dans les études portant sur la signalisation oncogénique, les défauts de checkpoints et les mécanismes pathologiques liés au cycle cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc25A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDC25A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDC25A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDC25A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cdc25A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDC25A pour l'étude de la signalisation de Cdc25A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDC25A essentiels à la fonction de Cdc25A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDC25A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cdc25A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cdc25A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDC25A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cdc25A plasmide HDR (h) et le Cdc25A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDC25A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDC25A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.