CD8-β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419577

Panoramica

Cd8b1 codifica CD8-β, una glicoproteina transmembrana di tipo I che si associa a CD8-α per formare il co-recettore CD8 nei linfociti T citotossici e in una sottopopolazione di cellule dendritiche. Legandosi all’MHC di classe I e reclutando la chinasi LCK della famiglia Src, CD8-β contribuisce a modulare l’intensità del segnale del recettore dei linfociti T (TCR), la formazione della sinapsi immunologica e le cascate di fosforilazione a valle che regolano attivazione, proliferazione e differenziamento effettrice. L’espressione di CD8-β influenza la selezione timica e il mantenimento periferico dei linfociti T CD8+, incidendo sull’immunità e sulla tolleranza specifiche per l’antigene. Un’alterata funzione del co-recettore CD8 è rilevante per la disregolazione immunitaria e per modelli di infezione, infiammazione e immunologia dei tumori, in cui le risposte dei linfociti T CD8+ contribuiscono a determinare i fenotipi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD8-β (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd8b1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd8b1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd8b1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD8-β.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd8b1 per lo studio della segnalazione di CD8-β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd8b1 critici per la funzione di CD8-β
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd8b1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD8-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD8-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd8b1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD8-β Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD8-β (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd8b1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd8b1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.