CD57 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402750-ACT

B3GAT1は、一般にCD57（HNK-1）糖鎖エピトープと関連づけられており、細胞表面の糖タンパク質や糖脂質上のHNK-1糖鎖構造の生合成に寄与するβ1,3-グルクロン酸転移酵素をコードしています。この糖鎖付加プログラムは、神経発生および免疫の文脈における細胞間認識、接着、シグナル伝達を支え、神経突起の伸長、シナプス構築、リンパ球分化などの過程に影響します。CD57/HNK-1関連糖鎖は、成熟したNK細胞およびT細胞サブセットのマーカーとして広く用いられており、神経学的・炎症性表現型における糖鎖リモデリングの変化とも関連づけられています。B3GAT1依存的な糖鎖付加が破綻すると、精密な糖鎖パターンに依存する細胞外マトリックス相互作用や受容体シグナル伝達経路が攪乱される可能性があります。

CD57 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性B3GAT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD57 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における B3GAT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はB3GAT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD57の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のB3GAT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD57依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびB3GAT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD57経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。