Plásmido Doble Nickase (m) CD47: sc-421180-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)CD47 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD47 (m) y el plásmido de doble nickasa CD47 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Cd47. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD47 Anticuerpo (MIAP301): sc-12731
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) CD47 | sc-421180-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) CD47 | sc-421180-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Cd47 codifica CD47, un receptor de la superfamilia de las inmunoglobulinas ampliamente expresado que funciona como una señal de “no me comas” al unirse a SIRPα en los macrófagos, modulando así la fagocitosis y los puntos de control inmunitarios innatos. CD47 también interactúa con trombospondina-1 para influir en la señalización de integrinas, la adhesión celular, la migración y las respuestas vasculares dependientes de óxido nítrico. En tejidos de ratón, CD47 contribuye a la eliminación homeostática de células, la regulación de la señalización inflamatoria y la conformación de las interacciones tumor–sistema inmune. La desregulación de la señalización de CD47 se ha implicado en el escape inmunitario, la inflamación crónica y alteraciones de la biología hematopoyética y vascular, lo que la convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos de las vías de vigilancia inmunitaria.
CD47 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cd47 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cd47. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cd47. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cd47 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.