CD45 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-400245-LAC-2

Il gene umano PTPRC codifica CD45, una fosfatasi tirosinica proteica di tipo recettoriale espressa sulla maggior parte delle cellule ematopoietiche, che regola le soglie di segnalazione defosforilando substrati chiave nelle cascate dei recettori immunitari. CD45 è un regolatore centrale della segnalazione del recettore dei linfociti T e del recettore dei linfociti B attraverso la modulazione delle chinasi della famiglia Src (ad es. LCK, FYN), influenzando così l’attivazione dei linfociti, la differenziazione e le risposte citochiniche. Un’alterata espressione di CD45 o l’uso di specifiche isoforme è collegato a disfunzioni della regolazione immunitaria ed è stato associato a fenotipi autoimmuni e alla biologia delle neoplasie ematologiche, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato per il profiling dei leucociti. Gli strumenti di ricerca su PTPRC/CD45 supportano studi sulla trasduzione del segnale, sul controllo a feedback dipendente dalle fosfatasi e sulla genomica funzionale in cellule immunitarie primarie e in sistemi modello ingegnerizzati.

Le particelle di attivazione lentivirale CD45 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PTPRC in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD45 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PTPRC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD45. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PTPRC e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.