CD36 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400233-ACT

Humanes CD36 kodiert einen multifunktionalen Scavenger-Rezeptor, der die Aufnahme langkettiger Fettsäuren und oxidierter Lipoproteine vermittelt und damit den Lipidstoffwechsel mit dem zellulären metabolischen Zustand koordiniert. CD36 ist an Programmen für Lipidtransport und -speicherung beteiligt und steht in Wechselwirkung mit entzündlicher Signalübertragung, einschließlich Prozessen, die mit der Aktivierung von Makrophagen und der Bildung von Schaumzellen verknüpft sind. Aufgrund seiner Funktionen in Endothel-, Adipozyten- und Immunzellbiologie wird CD36 häufig in Signalwegen untersucht, die Atherosklerose, Stoffwechselstörungen und chronischen Entzündungen zugrunde liegen. Eine veränderte CD36-Aktivität wurde zudem im Zusammenhang mit dem Stoffwechsel von Krebszellen und der Tumormikroumgebung untersucht, wo die Lipidnutzung Wachstum und Immunphänotypen beeinflussen kann.

CD36 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD36-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD36 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD36-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD36-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD36-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD36-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD36-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD36-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD36-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.