Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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CD30L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423454
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD30L Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CD30L, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD30L Antibody (RM153): sc-19984
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD30L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423454 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Tnfsf8 codifica CD30L (TNFSF8), un ligando di membrana di tipo II appartenente alla superfamiglia del TNF che si lega a CD30 (TNFRSF8) per modulare la comunicazione tra cellule immunitarie. La segnalazione CD30L–CD30 influenza programmi trascrizionali dipendenti da NF-κB e MAPK che modellano la costimolazione delle cellule T, la produzione di citochine e la differenziazione indotta dall’attivazione; può inoltre incidere sulle decisioni di sopravvivenza cellulare a seconda del contesto. Nei modelli murini, questo asse è spesso studiato nell’organizzazione dei tessuti linfoidi, nelle risposte del centro germinativo e nella regolazione di reti di segnalazione infiammatoria rilevanti per la disregolazione immunitaria e fenotipi linfoproliferativi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD30L (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnfsf8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnfsf8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnfsf8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD30L.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnfsf8 per lo studio della segnalazione di CD30L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Tnfsf8 critici per la funzione di CD30L
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnfsf8 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CD30L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD30L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnfsf8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CD30L Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD30L (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnfsf8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnfsf8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.