CD27L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402625-ACT

Il CD70 umano (CD27L) è un membro transmembrana di tipo II della superfamiglia dei ligandi del TNF, espresso principalmente sulle cellule presentanti l’antigene attivate e su sottopopolazioni di linfociti. Interagendo con CD27 su cellule T, cellule B e cellule NK, CD70 sostiene segnali costimolatori che modulano l’espansione clonale, la sopravvivenza e la differenziazione, influenzando le risposte del centro germinativo e la memoria immunologica. Questo asse si integra con programmi trascrizionali legati a NF-κB e MAPK a valle della segnalazione della famiglia dei TNFR e contribuisce alla produzione di citochine e alla funzione effettrice citotossica. Un’espressione deregolata di CD70 è stata associata ad alterazioni dell’attivazione immunitaria e a fenotipi di evasione immunitaria in molteplici contesti di ricerca sull’infiammazione e in oncologia, rendendolo rilevante per studi di immunologia dei tumori e di omeostasi immunitaria.

CD27L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD70 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD27L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD70 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD70, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD27L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD70 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD27L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD27L nelle cellule tumorali con espressione di CD70 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.