Particules Lentivirales d'Activation (h) CD274/PD-L1: sc-401140-LAC

CD274 code PD-L1 (CD274), un ligand de point de contrôle immunitaire transmembranaire de type I qui se lie à PD-1 (PDCD1) et module l’activation des cellules T, la production de cytokines et la tolérance périphérique. L’expression de PD-L1 est induite par des signaux inflammatoires tels que l’IFN-γ via la signalisation JAK/STAT et peut être régulée par des voies oncogéniques, notamment PI3K–AKT–mTOR et MAPK, reliant la signalisation immunitaire aux réponses cellulaires au stress. Par son interaction avec PD-1, PD-L1 contribue à l’atténuation des réponses immunitaires spécifiques d’antigène et façonne l’équilibre entre surveillance immunitaire et échappement immunitaire. Une régulation aberrante de PD-L1 a été associée à des dysfonctionnements immunitaires et fait l’objet de nombreuses études en immunologie du cancer ainsi que dans des modèles d’infection chronique et d’auto-immunité.

Les particules d'activation lentivirales CD274/PD-L1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CD274 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD274/PD-L1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CD274, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD274/PD-L1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CD274 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.