CCDC111 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404310

Panoramica

PRIMPOL (noto anche come CCDC111) codifica PrimPol, una primasi–polimerasi che favorisce la tolleranza al danno del DNA riavviando la sintesi del DNA a valle delle lesioni e contribuendo al riavvio della forcella di replicazione. Questa attività sostiene la stabilità del genoma durante la fase S e si interseca con vie coinvolte nelle risposte allo stress replicativo, nella riparazione post-replicativa e nel mantenimento dell’integrità del DNA mitocondriale e nucleare. Uno stress replicativo deregolato e un bypass delle lesioni compromesso sono associati all’accumulo di mutazioni e all’instabilità cromosomica, rendendo PRIMPOL un bersaglio rilevante per studiare i meccanismi che influenzano il mantenimento del genoma associato al cancro. Inoltre, la funzione di PRIMPOL viene spesso analizzata nel contesto del danno ossidativo, delle lesioni indotte dai raggi UV e degli eventi di switching tra polimerasi durante il recupero di forcelle bloccate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC111 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRIMPOL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRIMPOL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRIMPOL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CCDC111.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRIMPOL per lo studio della segnalazione di CCDC111, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRIMPOL critici per la funzione di CCDC111
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRIMPOL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CCDC111 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CCDC111 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRIMPOL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CCDC111 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CCDC111 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRIMPOL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRIMPOL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.