CBX8 Double Nickase Plasmid (h): sc-407903-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CBX8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CBX8 Double-Nickase-Plasmid (h) und CBX8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CBX8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CBX8: sc-374332
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CBX8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407903-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CBX8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407903-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBX8 (Chromobox 8) ist ein Protein der Polycomb-Gruppe, das als Chromatin-Reader innerhalb des kanonischen Polycomb-repressiven Komplexes 1 (PRC1) fungiert, repressive Histonmarkierungen erkennt und zur Aufrechterhaltung von Programmen der Transkriptionsstilllegung beiträgt. Durch PRC1-vermittelte Chromatinkondensation und die Regulation der Histon-Ubiquitinierung trägt CBX8 zur stabilen Kontrolle von Entwicklungsgenen, Zellidentität und zellzyklusgekoppelten Transkriptionszuständen bei. Eine fehlregulierte CBX8-Aktivität wurde mit veränderten epigenetischen Landschaften in Verbindung gebracht, die in verschiedenen Krankheitskontexten Proliferation, Differenzierung und seneszenzbezogene Signalwege beeinflussen. Aufgrund seiner Rolle in der Transkriptionsrepression ist CBX8 ein nützliches Ziel, um zu untersuchen, wie Polycomb-abhängige Chromatinregulation Gen-Netzwerke formt.
CBX8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CBX8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CBX8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CBX8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CBX8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.