Plasmide CRISPR/Cas9 KO CatSper (h): sc-403796

Présentation

CATSPER1 code CatSper, une sous-unité de canal ionique spécifique des spermatozoïdes, nécessaire à l’entrée de calcium qui déclenche la motilité hyperactivée et soutient la signalisation associée à la capacitation. L’activité du canal CatSper intègre les variations du potentiel de membrane et la dynamique intracellulaire de Ca2+ afin de réguler les schémas de battement du flagelle et les événements de phosphorylation en aval, essentiels à la fécondation. Une altération de CATSPER1 est liée à une fonction spermatique déficiente et associée à des phénotypes d’infertilité masculine, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques du contrôle de la motilité des spermatozoïdes. En tant que composant d’un complexe canal multi-sous-unités, CatSper1 constitue également un point d’entrée pour étudier l’assemblage, le trafic intracellulaire et la régulation des canaux ioniques spermatiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CatSper (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CATSPER1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CATSPER1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CATSPER1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CatSper.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CATSPER1 pour l'étude de la signalisation de CatSper, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CATSPER1 essentiels à la fonction de CatSper
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CATSPER1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CatSper plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CatSper plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CATSPER1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CatSper plasmide HDR (h) et le CatSper (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CATSPER1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CATSPER1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.