Plasmide Double Nickase (m) cathepsin B: sc-419873-NIC

Le gène murin **Ctsb** code la **cathepsine B**, une protéase cystéinique lysosomale qui assure le renouvellement intracellulaire des protéines et contribue à la protéolyse endosomale–lysosomale, à l’autophagie et au traitement des antigènes. Au-delà des lysosomes, la cathepsine B peut influencer le remodelage de la matrice extracellulaire via des réseaux de protéases, modulant la migration cellulaire et les programmes de remodelage tissulaire. Dans des modèles expérimentaux, une activité dérégulée de la cathepsine B a été associée à la signalisation inflammatoire, à des défauts de protéostasie liés à la neurodégénérescence et au remodelage du microenvironnement tumoral, faisant de **Ctsb** une cible fréquemment utilisée pour étudier les pathologies dépendantes des protéases. En tant que membre de la famille des cathepsines, elle s’insère dans des voies qui contrôlent la biogenèse lysosomale, la maturation des phagosomes et des mécanismes de mort cellulaire liés à la perméabilisation de la membrane lysosomale.

cathepsin B Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ctsb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ctsb. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ctsb. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ctsb.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.