CASZ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404756-ACT

CASZ1 (castor zinc finger 1) codifica um fator de transcrição humano que se liga ao DNA por meio de múltiplos domínios do tipo “zinc finger” C2H2, regulando programas de expressão gênica que controlam a especificação do destino celular, a diferenciação e a morfogênese tecidual. A atividade de CASZ1 tem sido associada a redes de sinalização do desenvolvimento que moldam linhagens neuronais e cardiovasculares, incluindo vias que influenciam a progressão do ciclo celular e a organização do citoesqueleto. A expressão desregulada de CASZ1 ou alterações em seus circuitos regulatórios está associada a fenótipos relevantes para doenças, como estados de diferenciação prejudicados e proliferação aberrante, com relevância relatada na biologia do neuroblastoma e no desenvolvimento vascular. Como regulador transcricional endógeno, CASZ1 é amplamente estudado para entender como programas transcricionais restritos a determinadas linhagens se articulam com a regulação da cromatina e com redes gênicas do desenvolvimento.

CASZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CASZ1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CASZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CASZ1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CASZ1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CASZ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CASZ1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CASZ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CASZ1 em células tumorais com expressão de CASZ1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.