CARM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425576

Übersicht

Carm1 kodiert die coaktivatorassoziierte Arginin-Methyltransferase 1 (CARM1/PRMT4), eine Histon- und Nicht-Histon-Protein-Arginin-Methyltransferase, die die Chromatinzugänglichkeit und Transkriptionsprogramme reguliert. CARM1 methyliert Substrate wie Histon H3 (z. B. H3R17/H3R26) sowie Transkriptionsregulatoren und koordiniert dadurch die RNA-Polymerase-II-abhängige Genexpression, alternatives Spleißen und signalabhängige Transkription. In Mauszellen beeinflusst Carm1 Signalwege, die mit Kernrezeptor- und Wachstumsfaktor-Signalisierung, Zellschicksalsentscheidungen sowie der epigenetischen Kontrolle von Differenzierung und Proliferation verknüpft sind. Eine fehlregulierte CARM1-Aktivität wird umfassend im Zusammenhang mit aberranter Transkriptionsregulation, Entwicklungsdefekten und onkogener Signalgebung untersucht und stellt damit ein relevantes Ziel für mechanistische Studien epigenetischer und transkriptioneller Netzwerke dar.

Das CARM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Carm1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Carm1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Carm1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CARM1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Carm1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CARM1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Carm1-Exone abzielen, die für die CARM1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Carm1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CARM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CARM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Carm1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CARM1 HDR-Plasmid (m) und CARM1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Carm1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Carm1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.