Carbonyl reductase 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406552

Panoramica

CBR3 codifica la carbonil reduttasi 3, un’ossidoreduttasi citosolica NADPH-dipendente che catalizza la riduzione di composti carbonilici reattivi, inclusi aldeidi e chetoni generati durante il metabolismo degli xenobiotici e lo stress ossidativo. Modulando l’equilibrio redox cellulare e la detossificazione dei carbonili, CBR3 contribuisce ai processi metabolici di fase I/II e aiuta a limitare l’accumulo di intermedi elettrofili che possono danneggiare proteine, lipidi e DNA. Le variazioni dell’attività di CBR3 sono state studiate nel contesto della diversa gestione dei prodotti endogeni della perossidazione lipidica e di vari substrati a piccola molecola, collegando questo enzima a vie rilevanti per le risposte allo stress e l’adattamento metabolico. Un’attività alterata delle carbonil reduttasi è frequentemente oggetto di studio in biologia del cancro, farmacologia e modelli di tossicologia, in cui lo stato redox e l’elaborazione dei metaboliti influenzano la sopravvivenza e il fenotipo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Carbonyl reductase 3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CBR3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CBR3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CBR3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Carbonyl reductase 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CBR3 per lo studio della segnalazione di Carbonyl reductase 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CBR3 critici per la funzione di Carbonyl reductase 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CBR3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Carbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Carbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CBR3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Carbonyl reductase 3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Carbonyl reductase 3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CBR3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CBR3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.