Calregulin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400775

Visão geral

CALR codifica a calreticulina, uma chaperona multifuncional do retículo endoplasmático (RE) e uma proteína de alta capacidade de ligação a Ca²⁺, que sustenta o controlo de qualidade da dobragem proteica e a homeostase do cálcio intracelular. A calreticulina participa no ciclo calnexina/calreticulina, coordenando a maturação de glicoproteínas e a retenção no RE, e contribui para a sinalização de stress do RE e para a resposta a proteínas mal dobradas (unfolded protein response). Para além do RE, a CALR influencia a apresentação de antigénios através da montagem do MHC de classe I, modula a adesão e a migração celular por meio de processos relacionados com integrinas e interage com vias de sinalização dependentes de Ca²⁺. A desregulação da atividade de CALR tem sido associada a alterações da proteostase e da sinalização imunitária em diversos contextos de doença, incluindo a biologia de neoplasias hematológicas e tumores sólidos, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos da função do RE e da regulação do estado celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Calregulin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CALR em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CALR, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CALR na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Calregulin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CALR para a investigação da sinalização de Calregulin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CALR críticos para a função Calregulin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CALR para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Calregulin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Calregulin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CALR. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Calregulin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Calregulin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CALR para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CALR definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.