Plásmido CRISPR de Activación (h) Calpain 7: sc-405085-ACT

El gen humano **CAPN7** codifica la calpaína 7, una proteasa de cisteína intracelular no lisosomal de la familia de las calpaínas que contribuye a la proteólisis regulada y a la proteostasis. Los eventos de corte mediado por calpaínas pueden remodelar complejos del citoesqueleto y asociados a membrana, influyendo en procesos como el tráfico intracelular, la progresión del ciclo celular y las cascadas de señalización sensibles al estrés. Mediante un procesamiento de sustratos dependiente del contexto, la actividad de CAPN7 puede confluir con vías que regulan la adhesión y la motilidad celular y con redes más amplias de control de calidad de proteínas. La señalización proteolítica desregulada y el desequilibrio de la proteostasis se observan con frecuencia en el cáncer y la neurodegeneración, lo que convierte a CAPN7 en una diana relevante para estudios mecanísticos de la regulación proteolítica en células humanas.

Calpain 7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAPN7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Calpain 7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAPN7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAPN7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Calpain 7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAPN7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Calpain 7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Calpain 7 en células tumorales con expresión de CAPN7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.