Calgizzarin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404169-ACT

S100A11 codifica a calgizzarina, uma proteína da família S100 de ligação ao cálcio que se associa a fosfolipídios e a elementos do citoesqueleto para regular a dinâmica de membrana, a motilidade celular e a sinalização adaptativa ao estresse. A calgizzarina participa de processos dependentes de Ca2+ que incluem remodelamento de actina, tráfego vesicular e coordenação da progressão do ciclo celular, sendo frequentemente estudada no contexto da plasticidade epitelial e de microambientes inflamatórios. Alterações na expressão de S100A11 têm sido associadas a proliferação desregulada, fenótipos ligados à invasão e resistência à apoptose em múltiplos modelos de câncer e fibrose. Como um sensor de cálcio com papel de hub, a calgizzarina oferece um ponto de entrada mecanístico para investigar como a sinalização de cálcio se integra à organização do citoesqueleto e a programas transcricionais.

Calgizzarin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S100A11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calgizzarin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S100A11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S100A11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calgizzarin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S100A11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calgizzarin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calgizzarin em células tumorais com expressão de S100A11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.