Plásmido Doble Nickase (h) C23 (Nucleolin): sc-400191-NIC

NCL codifica C23 (nucleolina), una abundante proteína nucleolar de unión a ARN que coordina la biogénesis de ribosomas mediante la transcripción del ADN ribosómico (rADN), el procesamiento del pre-ARNr y el ensamblaje de ribonucleoproteínas. Más allá del nucléolo, la nucleolina participa en la estabilidad del ARNm, la organización de la cromatina, las respuestas al daño del ADN y el tráfico nucleocitoplasmático, lo que la vincula con vías que regulan el crecimiento celular y la adaptación al estrés. La alteración de la expresión, la localización o las modificaciones postraduccionales de NCL se ha asociado con proliferación desregulada, mantenimiento deficiente del genoma y cambios en los programas de traducción observados en múltiples contextos patológicos, incluidos el cáncer y la neurodegeneración. Como andamio multifuncional, C23 se estudia ampliamente por sus funciones en la señalización del estrés nucleolar y la regulación del metabolismo del ARN.

C23 (Nucleolin) El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NCL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NCL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NCL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NCL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.