Plásmido CRISPR de Activación (h) c-IAP2: sc-400762-ACT

El gen humano **BIRC3** codifica **c-IAP2**, una ligasa E3 de ubiquitina con dominio RING que regula la apoptosis y la señalización inflamatoria al ubiquitinar componentes clave de los complejos del receptor de TNF y modular la activación de caspasas. c-IAP2 participa en el control de la vía de **NF-κB**, incluido el diálogo entre la señalización canónica y no canónica de NF-κB mediante la regulación de la estabilidad de **NIK** y el establecimiento de puntos de control dependientes de ubiquitina en la señalización proximal al receptor. A través de estas funciones, BIRC3 influye en la supervivencia celular, las respuestas inducidas por citocinas y la adaptación al estrés en contextos inmunitarios y epiteliales. La desregulación de la expresión o actividad de BIRC3 se ha vinculado a umbrales apoptóticos alterados y a una señalización aberrante de NF-κB observada en múltiples modelos relevantes de enfermedad, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en la investigación sobre muerte celular e inflamación.

c-IAP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BIRC3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

c-IAP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BIRC3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BIRC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de c-IAP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BIRC3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de c-IAP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía c-IAP2 en células tumorales con expresión de BIRC3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.