C/EBP α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419621

Descripción general

Cebpa codifica el factor de transcripción C/EBPα, un regulador con motivo “cremallera de leucina” básico que coordina el compromiso de linaje y la diferenciación terminal en múltiples tejidos, con funciones destacadas en el desarrollo mieloide y de adipocitos. En células hematopoyéticas, C/EBPα integra señales para controlar la salida del ciclo celular y los programas de maduración mediante la modulación de redes transcripcionales que gobiernan la proliferación y la diferenciación. Interactúa con vías implicadas en la regulación metabólica, la expresión de genes inflamatorios y la remodelación de la cromatina, influyendo en la identidad celular y las respuestas al estrés. La actividad desregulada de C/EBPα se estudia con frecuencia en el contexto de una diferenciación deteriorada, una homeostasis inmunitaria alterada y mecanismos de enfermedad hematológica en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C/EBP α (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cebpa en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cebpa junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cebpa tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C/EBP α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cebpa para la investigación de la señalización de C/EBP α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cebpa críticos para la función de C/EBP α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cebpa para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C/EBP α CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido C/EBP α CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cebpa. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C/EBP α (m) y el plásmido HDR C/EBP α (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cebpa para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cebpa definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.