Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Brm Double Nickase Plasmid (m): sc-426415-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Brm Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Brm Double-Nickase-Plasmid (m) und Brm Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Smarca2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Brm: sc-17828
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Brm Double Nickase Plasmid (m) | sc-426415-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Brm Double Nickase Plasmid (m2) | sc-426415-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Smarca2-Gen kodiert Brm (SMARCA2), eine ATP-abhängige Helicase-Untereinheit des SWI/SNF-(BAF)-Chromatin-Remodeling-Komplexes, der Nukleosomen repositioniert, um Transkriptionsprogramme zu regulieren. Brm trägt zur Koordination der Zugänglichkeit von Enhancern und Promotoren in Signalwegen bei, die Zellzyklusprogression, Linienspezifizierung, DNA-Schadensantworten und Differenzierung steuern. Eine veränderte SWI/SNF-Aktivität, einschließlich einer Störung der SMARCA2/BRM-Funktion oder der Komplexzusammensetzung, wird mit epigenetischer Fehlregulation in zahlreichen krankheitsrelevanten Kontexten wie der Krebsbiologie und neuroentwicklungsbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht. Smarca2 wird daher aufgrund seiner Rolle in der Chromatinarchitektur, der Kooperativität von Transkriptionsfaktoren und der Genomstabilität in Säugerzellen breit untersucht.
Brm Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Smarca2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Smarca2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Smarca2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Smarca2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.