BRCA1 Plasmide Double Nickase (m): sc-419362-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BRCA1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BRCA1 Double Nickase Plasmid (m) e il BRCA1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Brca1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BRCA1 Antibody (287.17): sc-135732
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BRCA1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419362-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BRCA1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419362-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Brca1 codifica BRCA1, un oncosoppressore multifunzionale che coordina la riparazione ad alta fedeltà delle rotture a doppio filamento del DNA tramite ricombinazione omologa e promuove la protezione delle forcelle di replicazione. BRCA1 opera in reti di sorveglianza del genoma che includono la segnalazione ATM/ATR e il controllo dei checkpoint, e forma complessi funzionali con partner quali BARD1, PALB2 e BRCA2 per regolare la resezione delle estremità e il caricamento di RAD51. Oltre alla riparazione del DNA, BRCA1 influenza il rimodellamento della cromatina e le risposte trascrizionali allo stress genotossico, modulando la progressione del ciclo cellulare e il mantenimento della stabilità genomica. L’alterazione di Brca1 è strettamente associata a un aumento del danno al DNA, all’instabilità cromosomica e a fenotipi rilevanti per la biologia della predisposizione al cancro nei sistemi mammiferi.
BRCA1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Brca1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Brca1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Brca1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Brca1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.