BMCP1 (UCP5) Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405051

Panoramica

SLC25A14 codifica BMCP1 (UCP5), un trasportatore della membrana interna mitocondriale appartenente alla famiglia delle proteine disaccoppianti, che modula la conduttanza protonica e il potenziale di membrana mitocondriale, influenzando così l’efficienza della fosforilazione ossidativa e l’equilibrio energetico cellulare. L’attività di UCP5 incide sulla produzione mitocondriale di specie reattive dell’ossigeno (ROS), sulla gestione del calcio e sulla suscettibilità alla disfunzione mitocondriale indotta da stress, collegandola all’omeostasi redox e alla bioenergetica neuronale. L’espressione è arricchita in contesti del sistema nervoso e un’alterata regolazione di UCP5 è stata studiata in meccanismi rilevanti per la neurodegenerazione, lo stress metabolico e i disturbi mitocondriali in cui l’efficienza dell’accoppiamento e lo stress ossidativo risultano alterati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BMCP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC25A14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC25A14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC25A14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BMCP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC25A14 per lo studio della segnalazione di BMCP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC25A14 critici per la funzione di BMCP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC25A14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BMCP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BMCP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC25A14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BMCP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BMCP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC25A14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC25A14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.