BID Plasmide Double Nickase (h): sc-400510-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BID Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BID Double Nickase Plasmid (h) e il BID Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BID. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BID Antibody (B-3): sc-373939
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BID Plasmide Double Nickase (h) | sc-400510-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BID Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400510-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BID codifica un membro pro-apoptotico “BH3-only” della famiglia BCL-2 e funge da collegamento fondamentale tra la segnalazione estrinseca mediata dai recettori di morte e la via apoptotica mitocondriale (intrinseca). In seguito al clivaggio da parte della caspasi-8 in BID troncata (tBID), promuove l’attivazione di BAX/BAK, la permeabilizzazione della membrana esterna mitocondriale, il rilascio del citocromo c e l’attivazione della cascata delle caspasi a valle. L’attività di BID integra segnali di stress e immunitari con le decisioni sul destino cellulare e interseca processi quali le risposte al danno del DNA e la segnalazione infiammatoria. Una disregolazione dell’apoptosi dipendente da BID è stata implicata nella sopravvivenza delle cellule tumorali, nella neurodegenerazione e nel danno tissutale mediato dal sistema immunitario, a supporto del suo frequente impiego come nodo meccanicistico negli studi su apoptosi e segnalazione mitocondriale.
BID Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BID nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BID. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BID. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BID interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.