Plásmido CRISPR de Activación (h) BID: sc-400510-ACT

El BID humano codifica una proteína de la familia BCL-2 que contiene únicamente el dominio BH3, y que conecta la señalización extrínseca mediada por receptores de muerte con la vía intrínseca mitocondrial de la apoptosis. Tras la escisión por caspasa-8 para generar BID truncado (tBID), promueve la permeabilización de la membrana externa mitocondrial dependiente de BAX/BAK, la liberación de citocromo c y la activación posterior de caspasas, integrando así las señales apoptóticas con las respuestas celulares al estrés. La actividad de BID se intersecta con la señalización de p53, con vías de supervivencia reguladas por NF-κB y con la dinámica mitocondrial que determina decisiones sobre el destino celular. La desregulación de la expresión o el procesamiento de BID se ha asociado con cambios en los umbrales apoptóticos observados en la biología del cáncer, la homeostasis inmunitaria y modelos de lesión tisular, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación de la muerte celular.

BID El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BID sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BID El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BID en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BID, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BID. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BID y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BID en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BID en células tumorales con expresión de BID silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.