beta-catenin Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-419477-LAC

O gene Ctnnb1 do camundongo codifica a beta-catenina, uma proteína multifuncional que conecta a adesão célula–célula mediada por caderinas a programas de transcrição governados pela sinalização canônica de Wnt. Na ausência de ligantes Wnt, a beta-catenina é direcionada para fosforilação e degradação pelo complexo de destruição APC–AXIN–GSK3, enquanto a ativação da via estabiliza a beta-catenina e promove sua associação nuclear com fatores de transcrição TCF/LEF. Por meio desse mecanismo de alternância, Ctnnb1 regula o padrão embrionário, a manutenção de células-tronco e progenitoras, a homeostase epitelial e a diferenciação. A sinalização desregulada da beta-catenina e a dinâmica alterada das junções aderentes estão amplamente associadas à transformação oncogênica, a fenótipos invasivos e a defeitos do desenvolvimento, tornando Ctnnb1 um nó central em modelos de doença focados em vias de sinalização.

As Partículas de Ativação Lentivirais beta-catenin (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Ctnnb1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais beta-catenin (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Ctnnb1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de beta-catenin. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Ctnnb1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.