beta Actin Double Nickaseプラスミド (m): sc-418965-NIC

マウスのActbは、βアクチンをコードする高度に保存された細胞骨格タンパク質であり、重合してフィラメント状アクチンを形成し、細胞形状、細胞皮質の張力、細胞内輸送を支えます。アクチン動態は、RhoファミリーGTPアーゼ、インテグリンシグナル、Arp2/3複合体やコフィリンなどのアクチン結合性制御因子が関与する経路を介して、細胞移動、接着、細胞質分裂、メカノトランスダクションといった基本的なプロセスを統合的に制御します。アクチンリモデリングの攪乱は組織の発生と恒常性に影響し、細胞運動性、バリア機能、細胞骨格の完全性の変化を伴う疾患関連表現型と広く関係します。細胞骨格ネットワークの中心的な結節点として、Actbは構造—機能相関の検討や、マウスモデル系における細胞摂動の正規化・ベンチマークにしばしば用いられます。

beta Actin ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Actb 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Actb内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Actbの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Actbが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。