Plásmido Doble Nickase (h) beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β₂-AR: sc-400291-NIC

ADRB2 codifica el receptor β2-adrenérgico humano (β2-AR), un receptor acoplado a proteínas G que detecta catecolaminas y se acopla principalmente a Gs para elevar el AMPc y activar la señalización dependiente de PKA. Mediante la regulación de la actividad de la adenilato ciclasa, la desensibilización del receptor a través de GRKs y β-arrestinas, y programas transcripcionales aguas abajo, ADRB2 influye en el tono del músculo liso, el metabolismo del músculo cardíaco y esquelético, y la señalización de células inmunitarias. El β2-AR también participa en procesos de internalización y tráfico del receptor que determinan la duración y el sesgo de la señal, integrándose con vías MAPK y rutas vinculadas al calcio de manera dependiente del contexto. La desregulación de la señalización o la expresión de ADRB2 se ha estudiado en el asma y la hiperrespuesta de las vías respiratorias, la fisiología cardiovascular, fenotipos metabólicos y la modulación neuroinmunitaria asociada al estrés, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para la investigación de vías y farmacología.

beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADRB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADRB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADRB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADRB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.