BCMA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423440

Panoramica

Tnfrsf17 codifica l’antigene di maturazione delle cellule B (BCMA), un membro della superfamiglia dei recettori del TNF espresso prevalentemente nelle plasmacellule e nelle cellule B in fase tardiva. BCMA lega APRIL e BAFF attivando le vie di segnalazione NF-κB canonica e non canonica, MAPK e PI3K/AKT, promuovendo la sopravvivenza delle plasmacellule, la secrezione di immunoglobuline e il mantenimento dell’immunità umorale. Nei modelli murini, la segnalazione dipendente da BCMA modula la differenziazione delle cellule B e le risposte anticorpali, collegando Tnfrsf17 all’omeostasi immunitaria e alla patologia tissutale associata all’infiammazione. La deregolazione della segnalazione di BCMA e l’espansione delle plasmacellule sono ampiamente utilizzate come readout molecolari negli studi di fenotipi simil-autoimmuni e di alterazioni della linea delle cellule B.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BCMA (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnfrsf17 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnfrsf17 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnfrsf17 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BCMA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnfrsf17 per lo studio della segnalazione di BCMA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnfrsf17 critici per la funzione di BCMA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnfrsf17 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BCMA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BCMA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnfrsf17. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BCMA Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BCMA (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnfrsf17 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnfrsf17 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.