BCMA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423440

Descripción general

Tnfrsf17 codifica el antígeno de maduración de células B (BCMA), un miembro de la superfamilia de receptores de TNF expresado predominantemente en células plasmáticas y células B en etapas tardías. BCMA se une a APRIL y BAFF para activar las vías de señalización NF-κB canónica y no canónica, MAPK y PI3K/AKT, promoviendo la supervivencia de las células plasmáticas, la secreción de inmunoglobulinas y el mantenimiento de la inmunidad humoral. En modelos murinos, la señalización dependiente de BCMA modula la diferenciación de las células B y las respuestas de anticuerpos, vinculando a Tnfrsf17 con la homeostasis inmunitaria y la patología tisular asociada a la inflamación. La desregulación de la señalización de BCMA y la expansión de células plasmáticas se utilizan ampliamente como lecturas moleculares en estudios de fenotipos tipo autoinmunes y de desregulación del linaje de células B.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BCMA (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnfrsf17 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnfrsf17 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnfrsf17 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BCMA.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnfrsf17 para la investigación de la señalización de BCMA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnfrsf17 críticos para la función de BCMA
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnfrsf17 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BCMA CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido BCMA CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnfrsf17. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BCMA (m) y el plásmido HDR BCMA (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnfrsf17 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnfrsf17 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.