Plasmide CRISPR/Cas9 KO BCLAF1 (m): sc-428381

Présentation

Bclaf1 code pour BCLAF1, un facteur nucléaire se liant à l’ADN et à l’ARN, impliqué dans la régulation transcriptionnelle, l’épissage des pré-ARNm et le contrôle de l’expression génique associé à la chromatine. BCLAF1 a été relié aux réponses aux dommages de l’ADN et aux programmes liés à l’apoptose via des interactions avec la signalisation de la famille BCL2 et des réseaux transcriptionnels sensibles au stress. Dans les cellules de souris, BCLAF1 contribue au maintien de la stabilité du génome ainsi qu’à la régulation des voies du cycle cellulaire et de survie qui façonnent l’expression génique au cours du développement et dans des contextes pertinents pour l’immunité. Une activité de BCLAF1 dérégulée a été associée à une capacité proliférative altérée et à des phénotypes aberrants de maturation de l’ARN, pertinents pour la biologie du cancer et des contextes de signalisation neuro-immune.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BCLAF1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Bclaf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Bclaf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Bclaf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BCLAF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Bclaf1 pour l'étude de la signalisation de BCLAF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Bclaf1 essentiels à la fonction de BCLAF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Bclaf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BCLAF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BCLAF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Bclaf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BCLAF1 plasmide HDR (m) et le BCLAF1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Bclaf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Bclaf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.