Plasmide Double Nickase (h) Bax: sc-400042-NIC

BAX code Bax, un effecteur pro‑apoptotique de la famille BCL‑2 qui gouverne la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale et engage les cellules dans l’apoptose intrinsèque. En réponse au stress cellulaire et aux signaux de dommages à l’ADN, Bax subit une activation conformationnelle, se relocalise vers les mitochondries et s’oligomérise afin de favoriser la libération du cytochrome c et l’activation en aval des caspases. L’activité de Bax s’intègre aux points de contrôle régulés par p53 et aux réseaux de signalisation de survie, façonnant ainsi les décisions de destinée cellulaire au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. Une signalisation BAX dérégulée est largement impliquée dans la biologie des cancers, la neurodégénérescence et les réponses au stress génotoxique, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée pour étudier l’apoptose et le contrôle de la voie mitochondriale.

Bax Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BAX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BAX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BAX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BAX.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.